BL698A荧光定量PCR试剂盒(5X1mL)
Biosharp BL698A荧光定量PCR试剂盒(5X1mL),是采用 SYBR Green I 嵌合荧光法进行Real Time PCR的试剂,将热启动Taq DNA聚合酶、dNTP、SYBR Green I等试剂预混成即用的2x Mix,可对目标cDNA进行快速并具有高特异性的定量检测。
Biosharp BL698A荧光定量PCR试剂盒(5X1mL)
厂家介绍:
Biosharp BL698A 荧光定量PCR试剂盒(SYBR Green qPCR Mix)
品牌:biosharp
货号:BL698A
规格:5X1mL
本产品是采用 SYBR Green I 嵌合荧光法进行Real Time PCR的试剂,将热启动Taq DNA聚合酶、dNTP、SYBR Green I等试剂预混成即用的2x Mix,可对目标cDNA进行快速并具有高特异性的定量检测。本产品采用化学修饰的Hot Start Taq DNA聚合酶,在 50 ℃以下无活性,只有 95 ℃条件下加热后才能*恢复酶的活力,Z大限度减少非特异性扩增产物的产生,提高荧光定量PCR反应的精确性。该试剂盒*的反应缓冲液,可在宽范围中得到良好的扩增结果、检测灵敏度更高、信号更强。
产品组分:
产品编号 | 产品名称 | 规格 |
1 | 2×SYBR Green qPCR Mix | 5 x 1ml |
2 | 50×ROX Reference Dye | 1ml |
保存条件:
收到本产品后,请立即置于-20℃避光保存,一年有效,2~8℃条件下储存6个月,避免反复多次冻融。
使用说明:
一、配制 Real-Time PCR反应体系:
1、将所有试剂2×SYBR Green qPCR Mix,ROX Reference Dye,模板,引物和RNase-Free ddH2O,在室温下融解并*混匀,避免产生气泡。短暂离心后,置于冰上按照下表配制反应液。
参考下表配制反应体系:
组分 | 20ul体系 | 终浓度 |
SYBR Green qPCR Mix | 10μl | 1× |
Primer F (10 μM)* | 0.4~0.8 μl | 0.2~0.4 uM* |
Primer R (10 μM)* | 0.4~0.8 μl | 0.2~0.4 uM* |
50 x ROX Reference Dye** | - | - |
cDNA模板 | - | -- |
RNase-Free ddH2O | 至20 μl | - |
* 一般来说反应体系中引物终浓度为0.2 uM即可得到较好的扩增效果。当反应性能比较差时,可以在终浓度0.2~0.4 uM范围内调整引物浓度。
** 几种常见仪器的Z适ROX Reference Dye浓度见下表:
仪器型号 | 使用浓度 |
ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/StepOne/ StepOne Plus等 | 5× |
ABI 7500/7500 Fast、QuantStudio ® 3/5、QuantStudio 6/7 Flex、ViiA 7、Stratagene Mx3000P/Mx3005P和Mx4000等 | 1× |
Roche、Bio-Rad、Eppendorf等 | 无需添加 |
2、盖上或密封反应管/PCR板,轻轻混匀。短暂离心,确保所有组分都在管/板底。
二、进行Real-Time PCR反应
1、建议采用两步法PCR反应程序进行反应。
两步法反应程序:
步骤 | 温度 | 持续时间 | 循环数 |
预变性 | 95℃ | 5min | 1 |
变性 | 95℃ | 10sec | 40 |
退火延伸数据采集 | 60℃ | 30sec | 40 |
熔解曲线分析 | 根据仪器程序设置 |
当模板量较低等因素导致扩增效果不佳,可使用三步法程序进行PCR反应。
三步法反应程序:
步骤 | 温度 | 持续时间 | 循环数 |
预变性 | 95℃ | 5min | 1 |
变性 | 95℃ | 10sec | 40 |
退火 | 50-60℃ | 30sec | 40 |
延伸数据采集 | 72℃ | 30sec | 40 |
熔解曲线分析 | 根据仪器程序设置 |
2、上机检测:将反应体系置于荧光定量 PCR 仪中,运行程序收集数据并分析结果。
Biosharp BL698A荧光定量PCR试剂盒(5X1mL)